Pengenalan kepada Media Kultur Sel Klasik, bagaimana untuk memilih media?

Banyak jenis media kultur sel klasik, seperti DMEM, RPMI 1640, MEM dan DMEM/F12, adalah yang paling banyak digunakan. Lain-lain, seperti medium M199, IMDM dan L15, juga digunakan untuk mengkultur sel tertentu. Ciri-ciri dan aplikasi media kultur sel ini adalah seperti berikut.

1. Medium kultur sel BME

Medium asas Eagle direka oleh Eagle pada tahun 1955, mengandungi BSS + 12 jenis asid amino + glutamin + 8 jenis vitamin. Ia ringkas, mudah ditambah dan sesuai untuk pelbagai saluran sel yang dilalui dan kegunaan penyelidikan khas, berdasarkan jenis medium kultur sel yang dipertingkatkan ialah MEM, DMEM, IMDM, dsb.

2. Medium kultur sel MEM

Ini ditambah baik pada medium asas Eagle (BME) pada tahun 1959, lisin dan biotin telah dikeluarkan, dan kepekatan asid amino telah meningkat. Walau bagaimanapun, kerana kandungan nutrien yang terhad, ia tidak semestinya medium terbaik untuk kultur sel khusus pengeluaran.

3. Medium kultur sel DMEM

DMEM ialah medium Eagle yang diubah suai oleh Dulbecco, pada mulanya direka untuk fibroblas tetikus. DMEM mempunyai dua kali ganda kepekatan asid amino MEM, empat kali ganda kepekatan vitamin MEM, dan menggunakan dua kali ganda kepekatan HCO3- dan CO2 untuk penimbalan yang lebih baik. Formulasi asal mengandungi 1000 mg/L glukosa, yang kemudiannya diselaraskan kepada 4500 mg/L untuk pertumbuhan sel tertentu, sering dirujuk sebagai glukosa rendah dan tinggi.

Gula rendah sesuai untuk kultur sel yang melekat bergantung, terutamanya untuk kultur sel tumor dengan kadar pertumbuhan yang cepat dan lekatan yang lemah. Gula tinggi lebih sesuai untuk kultur sel suspensi berketumpatan tinggi, untuk kultur klon dengan perlekatan yang lemah tetapi tidak mahu ia tercabut dari titik pertumbuhan asal, dan untuk kultur sel mieloma dan sel yang diubah yang ditransfeksi dengan DNA dalam hibridoma.

4. Medium kultur sel IMDM

Guilber dan Iscove mengubah suai Dulbecco' Medium kepada Iscove's Medium untuk mengkultur eritrosit dan prekursor makrofaj. Medium kultur sel IMDM mengandungi selenium, asid amino tambahan dan vitamin, natrium piruvat, dan HEPES dan menggantikan nitrat besi dengan kalium nitrat. IMDM juga menggalakkan pertumbuhan limfosit B tikus, sel B yang dirangsang LPS, sel hematopoietik sumsum tulang, sel T, dan sel limfoma.IMDM ialah medium kultur yang sangat kaya dengan nutrien dan boleh digunakan untuk pembiakan pesat sel berketumpatan tinggi.

5. Medium kultur sel RPMI-1640

Dibangunkan oleh Moore et al. di Roswell Park Memorial Institute pada tahun 1967, ia direka untuk kultur limfosit dan mengandungi BSS + 21 jenis asid amino + 11 jenis vitamin. Ia kini juga digunakan untuk kultur sel penggantungan, seperti mamalia, sel hematopoietik khas, leukosit yang membiak normal atau malignan, dan sel hibridoma. Limfosit dewasa lain seperti K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, sel limfoma sel T dan sel epitelium HCT-15 boleh digunakan untuk rujukan.

6. Medium kultur sel HamF10

1963 Reka bentuk ham, mengandungi unsur surih, boleh digunakan apabila kandungan serum rendah, sesuai untuk kultur klon. f10 sesuai untuk hamster, dan sel diploid manusia, terutamanya sesuai untuk kultur sel cecair amniotik.

7. Medium kultur sel DMEM/F12

Ham's F12 direka untuk pengklonan sel CHO pada kepekatan serum yang rendah dan kini digunakan secara meluas dalam analisis kadar pembentukan klon dan kultur primer. F12 juga boleh digunakan dengan DMEM dan volum lain untuk mendapatkan kepekatan tinggi dan komposisi produk yang pelbagai. Medium ini telah digunakan pada banyak budaya primer, dan lebih sukar untuk meningkatkan budaya garisan sel. Ia juga sering digunakan sebagai medium asas untuk kultur bebas serum kerana kandungan nutrien yang kaya dan keupayaan untuk menggunakan kurang serum.

8. Medium kultur sel M199

Medium M-199 ialah medium kultur sel dengan komposisi kimia tertakrif yang direka oleh Morgan et al. pada tahun 1950. Ia mengandungi 53 komponen selain BSS dan merupakan medium komprehensif yang digunakan terutamanya untuk kultur fibroblast embrio anak ayam. medium m-199 mesti ditambah dengan serum untuk menyokong budaya jangka panjang. Ia boleh digunakan untuk mengkultur sel dari banyak spesies asal dan boleh mengkultur sel yang ditransfeksi, dan kini digunakan secara meluas untuk pengeluaran virologi dan vaksin.

9. Sederhana McCoy5A

Medium McCoy5A ialah medium kultur sel yang direka oleh MeCoy pada tahun 1959 untuk sel sarkoma dan mengandungi BSS dan 40 komponen lain. Ia boleh menyokong pertumbuhan pelbagai cantuman primer (seperti sumsum tulang, kulit, paru-paru, dan limpa) dan digunakan terutamanya untuk kultur biopsi tisu, sesetengah kultur limfosit, dan sokongan pertumbuhan beberapa sel yang sukar untuk dikultur, sebagai tambahan kepada primer umum. kultur sel—contohnya, fibroblas sarkoma tikus Jensen, limfosit manusia, HT-29, BHL-100 dan sel epitelium lain.

10. Medium Kultur Sel L15

Medium kultur L-15 sesuai untuk kultur sel tumor yang membiak dengan cepat dan digunakan untuk menkultur garisan sel tumor tanpa ketiadaan CO2. Medium kultur ini menggunakan sistem penimbal fosfat dengan komposisi asid amino yang lebih baik dan glukosa digantikan oleh galaktosa.

Bagaimana untuk memilih medium kultur sel?

1. Anda boleh menyemak literatur rujukan atau merujuknya apabila anda membeli talian sel. Anda juga boleh mencari di tapak web beberapa syarikat biologi, seperti tapak web Invitrogen, yang mempunyai alat Pangkalan Data Talian Sel. Pilih jenis sel yang anda minati, dan ia akan memaparkan media yang disyorkan, serum dan reagen pemindahan, dsb., kadangkala dengan langkah pemindahan yang dioptimumkan, yang sangat mudah.
2. Anda juga boleh merujuk kepada media biasa yang digunakan dalam makmal lain, kebanyakannya sesuai untuk membiak berbilang sel.
3. Pilih medium mengikut ciri garisan sel dan keperluan percubaan. Sebagai contoh, garisan sel tetikus kebanyakannya dipilih RPMI1640.
4. Gunakan pelbagai media untuk menkultur sel sasaran, dan perhatikan status pertumbuhannya. Anda boleh menggunakan lengkung pertumbuhan, kadar pembentukan koloni, dan penunjuk lain untuk menilai, mengikut keputusan eksperimen, untuk memilih medium terbaik, yang merupakan kaedah yang paling objektif tetapi lebih membosankan.