Soalan Lazim Medium Kultur Sel

Soalan Lazim (FAQ) mengenai Medium Kultur Sel

I. Pemilihan Medium Kultur Sel

1. Bagaimana untuk memilih medium yang sesuai untuk sel saya?

• Rujukan Utama: Medium yang digunakan untuk mewujudkan garisan sel tertentu biasanya merupakan pilihan pertama. Rujuk literatur yang berkaitan atau pembekal sel anda.
• Berdasarkan Jenis Sel dan Eksperimen:
  • Talian sel tetikus sering dibiakkan di RPMI 1640.
  • Untuk hibridisasi sel, eksperimen pemindahan gen, IMDM boleh dipilih.
• Kaedah Empirikal (Disyorkan): Kultur sel dalam pelbagai jenis media dan bandingkan hasil menggunakan penunjuk seperti lengkung pertumbuhan dan kecekapan penyaduran untuk memilih medium yang optimum.
• Rujuk Pangkalan Data Berwibawa: . ATCC (Koleksi Budaya Jenis Amerika) laman web menyediakan maklumat kultur terperinci untuk kebanyakan talian sel, termasuk media yang disyorkan, keadaan dan kesusasteraan berkaitan.

II. Penyimpanan dan Jangka Hayat

2. Bolehkah medium cecair disimpan pada -20°C?

• Tiada. Penyimpanan pada -20°C boleh menyebabkan garam dalam medium memendakan. Apabila dicairkan, garam ini mungkin tidak larut semula sepenuhnya, menyebabkan penurunan osmolariti. Ini boleh menyebabkan sel pecah dan mati.

3. Berapa lama medium cecair yang baru disediakan boleh disimpan?

• Adalah disyorkan untuk menyimpan medium yang baru disediakan di 4°C terlindung daripada cahaya dan gunakannya dalam masa satu minggu. Lebih segar medium, lebih baik.

4. Bolehkah medium yang ditambah dengan serum dan antibiotik disimpan untuk jangka masa panjang?

• Tidak. Sebaik sahaja serum dan antibiotik ditambah kepada medium segar, ia harus digunakan dalam dua hingga tiga minggu. Sesetengah antibiotik dan komponen penting dalam serum mula merosot selepas dicairkan.

5. Mengapakah medium yang disimpan di dalam peti sejuk bertukar menjadi merah gelap (beralkali)?

• Apabila disimpan pada suhu 4°C, CO₂ secara beransur-ansur keluar daripada medium, menyebabkan pH meningkat (menjadi lebih alkali). Penunjuk pH merah fenol bertukar menjadi merah-ungu gelap dalam keadaan beralkali.
• penyelesaian: pH boleh diselaraskan dengan menggelegak CO₂ yang disterilkan penapis melalui medium sebelum digunakan.

III. Komponen & Bahan Tambahan

6. Adakah perlu menambah antibiotik ke dalam medium?

• Umumnya tidak disyorkan. Antibiotik tidak boleh ditambah kepada kultur rutin untuk mengelak daripada menutup pencemaran halus atau memberikan kesan sitotoksik pada sel.
• pengecualian: Untuk mengelakkan pencemaran bakteria/kulat, Penicillin-Streptomycin (Pen-Strep) boleh ditambah. Kepekatan akhir biasa ialah 100 U/mL Penisilin dan 100 µg/mL Streptomycin.

7. Perlukah kepekatan antibiotik diselaraskan untuk kultur bebas serum?

• Ya, kurangkan jumlahnya. Kepekatan antibiotik perlu dikurangkan sebanyak sekurang-kurangnya 50% berbanding dengan kepekatan yang digunakan dalam media yang mengandungi serum. Protein serum mengikat dan menyahaktifkan beberapa antibiotik; penyahaktifan ini tidak berlaku dalam keadaan bebas serum.

8. Mengapakah sesetengah eksperimen memerlukan medium bebas fenol merah?

• Dua sebab utama:
  1. Kesan hormon: Merah fenol boleh meniru kesan hormon steroid (terutamanya estrogen), mengganggu eksperimen menggunakan sel sensitif hormon.
  2. Gangguan dengan Pengesanan: Sifat pendarfluor fenol merah boleh mengganggu kaedah pengesanan seperti sitometri aliran.

9. Apakah fungsi komponen medium biasa?

• NaHCO₃ (Natrium Bikarbonat): Membentuk sistem penimbalan dengan CO₂ untuk mengekalkan pH yang stabil dalam inkubator.
• Natrium Piruvat: Berfungsi sebagai sumber karbon alternatif untuk sel (apabila glukosa rendah). Kepekatan akhir biasa ialah 1 mM.
• HEPES: Penampan kimia yang kuat yang menyediakan penstabilan pH tambahan, terutamanya di luar persekitaran inkubator CO₂. Kepekatan akhir biasa ialah 25 mM.
• Merah Fenol: Bertindak sebagai penunjuk pH (Merah = Neutral ~7.4, Kuning = Berasid, Ungu = Beralkali).
• L-Glutamine: Asid amino penting untuk sel, terlibat dalam metabolisme tenaga dan sintesis protein. Ia adalah tidak stabil dalam larutan dan mesti disimpan beku di -20 ° C. Ia biasanya ditambah kepada medium sejurus sebelum digunakan. Kepekatan akhir biasa ialah 2 mM. Medium yang ditambah dengan glutamin perlu ditambah semula jika disimpan pada suhu 4°C lebih lama daripada minggu 2.

IV. Pengaruh pH

10. Bagaimanakah pH sederhana mempengaruhi pertumbuhan sel?

• pH optimum untuk kebanyakan sel ialah 7.2 - 7.4. Penyimpangan daripada julat ini boleh membahayakan.
• Sel umumnya bertolak ansur keasidan ringan lebih baik daripada kealkalian ringan.
• Catatan: pH cecair selalunya meningkat sebanyak ~ 0.2 unit selepas penapisan melalui penapis 0.1µm atau 0.2µm.

11. Mengapakah medium RPMI 1640 kami kelihatan kuning? Adakah pH salah?

• Ini adalah perkara biasa. Disebabkan formulasinya, RPMI 1640 ialah varian merah fenol rendah; ia mengandungi sahaja satu per empat jumlah fenol merah yang terdapat dalam DMEM. Warna yang lebih cerah dan kekuningan disebabkan oleh kepekatan yang lebih rendah ini, bukan pH rendah yang salah.