Kit Pengekstrakan RNA DNA HCY™ 96

Sudah tentu. Biar saya memberi anda maklumat terperinci tentang Kit Pengekstrakan DNA/RNA HCY™ 96.

Ini ialah kit pengekstrakan asid nukleik berkemampuan tinggi yang direka untuk digunakan dalam makmal yang memproses sejumlah besar sampel, seperti dalam diagnostik klinikal, pengesanan patogen dan penyelidikan genomik.

Berikut ialah pecahan menyeluruh ciri, prinsip, prosedur biasa dan aplikasinya.

Pengenalan

. Kit Pengekstrakan DNA/RNA HCY™ 96 ialah berasaskan manik magnetik sistem penulenan diformatkan untuk 96-plat perigi. Ia membolehkan pembersihan serentak kedua-dua DNA dan RNA daripada sampel tunggal dalam aliran kerja automatik atau separa automatik. Ini penting untuk aplikasi seperti pengesanan patogen (cth, SARS-CoV-2, influenza, virus pernafasan syncytial), di mana ujian untuk berbilang sasaran daripada satu sampel adalah perkara biasa.

Ciri-ciri utama

1. Kuasa Tinggi: Direka untuk plat 96 telaga, menjadikannya sesuai untuk memproses 96 sampel serentak. Ia serasi dengan platform pengendalian cecair automatik dan pemproses manik magnetik.
2. Pengekstrakan Dwi: Ekstrak bersama kedua-duanya dengan cekap DNA genomik dan jumlah RNA daripada satu sampel lisat. Ini menjimatkan masa, reagen dan bahan sampel.
3. Teknologi Manik Magnet: Menggunakan matriks manik magnet berasaskan silika untuk mengikat asid nukleik. Kaedah ini terkenal dengan ketulenan yang tinggi, hasil dan kemudahan automasi berbanding kaedah lajur putaran tradisional.
4. Ketulenan dan Hasil Tinggi: Penampan dan langkah pencucian yang dioptimumkan mengeluarkan perencat seperti protein, garam dan bahan cemar lain, menghasilkan DNA dan RNA berkualiti tinggi yang sesuai untuk aplikasi hiliran yang sensitif.
5. Prosedur Pantas: Keseluruhan proses boleh diselesaikan dalam 20-40 minit untuk plat 96-telaga penuh, bergantung pada peralatan automasi yang digunakan.
6. Keserasian Sampel Luas: Boleh digunakan dengan pelbagai jenis sampel, termasuk:
   • Sampel swab (nasofaring, orofarinks)
   • Serum / Plasma
   • Supernatan kultur sel
   • Tisu homogenat
   • Cecair badan

Prinsip Kaedah

Kit ini beroperasi berdasarkan prinsip penulenan asid nukleik manik silika-magnet:

1. Lisan: Sampel dilisiskan dengan penimbal garam chaotropic yang kuat (biasanya mengandungi Guanine-HCl atau Guanine Thiocyanate). Penampan ini menyahturasi protein, menyahaktifkan nuklease (RNases dan DNases), dan membebaskan asid nukleik (DNA dan RNA) ke dalam larutan.
2. Binding: Dengan adanya penimbal lisis dan larutan pengikat, asid nukleik secara khusus mengikat pada permukaan manik magnet bersalut silika. Garam chaotropic mengganggu struktur air, membenarkan tulang belakang fosfat bercas negatif asid nukleik berinteraksi dengan permukaan silika bercas positif.
3. Tangkap & Cuci: Dirian magnetik (atau rod magnet dalam sistem automatik) digunakan untuk melumpuhkan kompleks asid manik-nukleik pada dinding tiub/plat. Supernatan dikeluarkan, dan manik dicuci 2-3 kali dengan penimbal pencuci yang mengandungi etanol. Cucian ini mengeluarkan garam, protein, lipid, dan kekotoran lain tanpa mengelusi asid nukleik.
4. Elusi: Selepas pencucian terakhir dan pengeringan lengkap untuk mengeluarkan sisa etanol, asid nukleik tulen dicairkan daripada manik menggunakan penimbal garam rendah (cth, Penampan TE atau Air Tanpa Nuklease). Penampan elusi mengganggu interaksi antara silika dan asid nukleik, melepaskannya ke dalam larutan bersih terakhir.

Aliran Kerja Biasa (Diringkas)

1. Sediakan Lysate: Campurkan sampel dengan Proteinase K (jika perlu) dan Lysis Buffer. Inkubasi untuk menyelesaikan lisis.
2. Mengikat: Pindahkan lysate ke plat telaga dalam 96-telaga. Tambah manik magnet dan Penyelesaian Pengikat. Campurkan dengan teliti untuk membenarkan asid nukleik mengikat manik.
3. Menangkap: Letakkan plat pada dirian magnet sehingga larutannya hilang. Sedut dan buang supernatan.
4. Basuh 1: Tambah Penimbal Basuh 1, gaul untuk menggantung semula manik, tangkap pada magnet, dan buang supernatan.
5. Basuh 2: Tambah Wash Buffer 2, campurkan, tangkap dan buang supernatan.
6. Kering: Keringkan pelet manik dengan udara selama beberapa minit untuk memastikan semua etanol daripada penimbal pencuci telah tersejat.
7. Elute: Tambah Penampan Elusi, gaul sebati, eramkan selama beberapa minit, dan tangkap manik. Supernatan kini mengandungi DNA/RNA yang telah disucikan dan dipindahkan ke plat atau tiub baru.

Aplikasi Hilir

DNA dan RNA berkualiti tinggi yang diekstrak dengan kit ini sesuai untuk pelbagai aplikasi biologi molekul sensitif:

• RT-PCR Masa Nyata (qRT-PCR): Aplikasi utama, terutamanya untuk pengesanan virus (cth, ujian COVID-19).
• PCR
• Penjujukan Generasi Seterusnya (NGS)
• Analisis Mikroarray
• Pengklonan
• Diagnostik Molekul

Ringkasan

. Kit Pengekstrakan DNA/RNA HCY™ 96 ialah alat yang berkuasa untuk makmal molekul moden yang memerlukan kecekapan, skalabiliti dan kebolehpercayaan. Manik magnetiknya, format 96-telaga ialah piawaian industri untuk makmal diagnostik dan penyelidikan berkemampuan tinggi, membolehkan penyediaan asid nukleik yang cepat dan tepat untuk analisis hiliran kritikal.

Penafian: Untuk protokol yang paling tepat dan khusus, sentiasa rujuk kepada arahan pengeluar rasmi yang disediakan bersama kit.