Masukkan kata kunci anda

Cari seluruh stesen Bekalan Pandemik

Proses pengekstrakan asid nukleik

Pengekstrakan asid nukleik ialah langkah asas dalam biologi molekul dan ujian diagnostik, membolehkan penyelidik dan profesional penjagaan kesihatan mengasingkan DNA atau RNA daripada pelbagai sampel biologi untuk analisis hiliran. Berikut ialah gambaran keseluruhan proses pengekstrakan asid nukleik:

Koleksi Contoh: Proses bermula dengan pengumpulan sampel biologi yang mengandungi asid nukleik sasaran. Sampel boleh termasuk darah, tisu, air liur, sapuan, air kencing atau cecair badan lain, bergantung pada aplikasi khusus.

Contoh Lisis: Sampel yang dikumpul dilisiskan untuk memecahkan sel dan membebaskan asid nukleik. Penampan lisis yang mengandungi detergen, agen chaotropic atau enzim biasanya digunakan untuk mengganggu membran sel dan merendahkan protein, membolehkan akses kepada asid nukleik.

Pengikatan Asid Nukleik: Sebaik sahaja asid nukleik dibebaskan ke dalam lisat, ia perlu diikat secara selektif pada matriks fasa pepejal, seperti membran silika atau manik magnet. Pilihan matriks pengikat bergantung pada faktor seperti jenis sampel, jenis asid nukleik (DNA atau RNA), dan aplikasi hiliran.

Cuci: Selepas mengikat, matriks fasa pepejal dicuci untuk membuang bahan cemar seperti protein, lipid dan serpihan selular yang lain. Langkah mencuci membantu membersihkan asid nukleik dan mengurangkan bunyi latar belakang dalam analisis seterusnya.

Elusi: Asid nukleik tulen kemudiannya dielusi daripada matriks fasa pepejal menggunakan penimbal garam rendah atau air. Elusi membebaskan asid nukleik ke dalam larutan bersih, sedia untuk aplikasi hiliran seperti PCR (tindak balas rantai polimerase), penjujukan, atau ujian molekul lain.

Kawalan Kualiti: Asid nukleik yang diekstrak mungkin menjalani langkah kawalan kualiti untuk menilai kepekatan, ketulenan dan integritinya. Kaedah biasa untuk kuantifikasi termasuk spektroskopi UV (cth, menggunakan spektrofotometer) atau fluorometri (cth, menggunakan ujian berasaskan pendarfluor). Ketulenan sering dinilai dengan mengukur nisbah penyerapan pada panjang gelombang tertentu (cth, nisbah A260/A280 untuk DNA atau nisbah A260/A230 untuk RNA). Integriti boleh dinilai dengan elektroforesis gel atau elektroforesis kapilari.

Pada Suhu Ambien: Asid nukleik yang telah dimurnikan boleh disimpan pada suhu yang sesuai (-20°C atau -80°C) untuk penyimpanan jangka pendek atau jangka panjang, bergantung pada keperluan penggunaan dan kestabilan yang dimaksudkan.

Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa protokol pengekstrakan asid nukleik boleh berbeza-beza bergantung pada jenis sampel tertentu, jenis asid nukleik yang dikehendaki, aplikasi hiliran dan peralatan atau kit yang tersedia. Penyelidik dan kakitangan makmal sering mengoptimumkan protokol pengekstrakan untuk mencapai hasil yang tinggi, ketulenan dan integriti asid nukleik yang diekstrak untuk analisis hiliran yang boleh dipercayai. Selain itu, pendekatan berasaskan automasi dan kit telah menjadi semakin biasa untuk menyelaraskan dan menyeragamkan proses pengekstrakan, terutamanya dalam tetapan makmal berkemampuan tinggi.

Proses pengekstrakan asid nukleik virus influenza

Proses pengekstrakan asid nukleik untuk virus influenza biasanya mengikut aliran kerja yang serupa dengan pengekstrakan asid nukleik am, dengan beberapa pertimbangan khusus untuk virus dan sampel sedang diproses. Berikut ialah gambaran keseluruhan proses pengekstrakan asid nukleik untuk virus influenza:

Pengumpulan Sampel: Sapuan nasofaring, sapuan hidung, sapuan tekak, atau rembesan pernafasan biasanya dikumpulkan daripada individu yang disyaki mempunyai jangkitan influenza.

Penyahaktifan Sampel: Untuk memastikan biokeselamatan dan mencegah penghantaran virus, sampel yang dikumpul boleh dirawat dengan penimbal penyahaktifan virus atau rawatan haba yang sesuai untuk menjadikan virus tidak berjangkit sambil mengekalkan asid nukleik untuk pengekstrakan.

Lisis Sampel: Sampel yang tidak aktif dilisiskan untuk membebaskan RNA virus. Penampan lisis yang mengandungi detergen, agen chaotropic, atau enzim digunakan untuk mengganggu sampul virus dan membebaskan asid nukleik virus.

Pengikatan Asid Nukleik: Selepas lisis, RNA virus diikat secara selektif kepada matriks fasa pepejal, seperti membran silika atau manik magnet, melalui proses yang biasanya melibatkan garam dan etanol huru-hara. Langkah ini membolehkan penulenan dan kepekatan RNA virus.

Pencucian: Matriks fasa pepejal yang mengandungi RNA virus terikat dibasuh untuk membuang bahan cemar seperti protein, serpihan selular dan perencat yang mungkin mengganggu aplikasi hiliran.

Elusi: RNA virus yang telah dimurnikan dielusi daripada matriks fasa pepejal menggunakan penimbal garam rendah atau air. Elusi membebaskan RNA virus ke dalam larutan bersih, sedia untuk analisis hiliran seperti tindak balas rantai polimerase transkripsi terbalik (RT-PCR) untuk pengesanan dan pencirian virus influenza.

Kawalan Kualiti: RNA virus yang diekstrak mungkin menjalani langkah kawalan kualiti untuk menilai kepekatan, ketulenan dan integritinya menggunakan kaedah seperti spektroskopi UV, fluorometri atau RT-PCR.

Penyimpanan: RNA virus yang telah disucikan boleh disimpan pada suhu yang sesuai (-20°C atau -80°C) untuk penyimpanan jangka pendek atau jangka panjang, bergantung pada keperluan penggunaan dan kestabilan yang dimaksudkan.

Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa proses pengekstrakan asid nukleik untuk virus influenza mungkin berbeza-beza bergantung pada faktor seperti jenis sampel tertentu, beban virus, kaedah pengesanan yang digunakan dan peralatan atau kit yang tersedia. Selain itu, langkah berjaga-jaga biokeselamatan harus dipatuhi dengan ketat untuk mencegah penularan virus semasa pemprosesan sampel. Platform pengekstrakan automatik dan kit pengekstrakan komersial yang direka khusus untuk pengesanan virus influenza biasanya digunakan untuk menyelaras dan menyeragamkan proses pengekstrakan di makmal klinikal dan penyelidikan.

yang sebelumnya: Seterusnya:

Cadangan berkaitan

    Kembangkan lagi!