Tindak balas Rantaian Polimerase, Enzim PCR Biasa

PCR (tindak balas rantai polimerase) ialah teknik yang biasa digunakan untuk menguatkan molekul DNA secara in vitro, dan enzim PCR adalah komponen utama tindak balas ini. Jenis utama enzim PCR termasuk Taq polymerase, Pfu polymerase, dan varian hot-start Taq Polimerase DNA.

Taq polimerase

Taq polimerase adalah salah satu enzim PCR pertama yang digunakan secara meluas. Ia diasingkan daripada bakteria yang dikenali sebagai Thermus aquaticus dan mempunyai rintangan haba yang sangat baik. Polimerase Taq stabil pada suhu tinggi dan sesuai untuk langkah penyahnatutan, penyepuhlindapan dan lanjutan PCR. Walau bagaimanapun, polimerase Taq mengalami kadar ralat yang tinggi di kawasan dengan kandungan GC yang tinggi kerana ia tidak mempunyai fungsi pembetulan exonucleation 3'-5'.

Pfu Polimerase

Polimerase Pfu diasingkan daripada cyanobacteria termofilik dan lebih unggul dalam rintangan haba berbanding polimerase Taq. Ia mempunyai fungsi pembetulan exonucleotide 3'-5', jadi ia mempunyai kadar ralat yang lebih rendah dan menjana produk penguatan yang lebih tepat apabila menguatkan kawasan dengan kandungan GC yang tinggi.

Varian permulaan panas bagi Taq DNA polymerase

Memandangkan Taq polymerase perlu diaktifkan pada suhu yang lebih tinggi, produk tidak khusus mungkin dihasilkan pada permulaan tindak balas PCR. Untuk mengatasi masalah ini, enzim PCR hot-start telah diperkenalkan, termasuk varian tidak aktif pada suhu rendah dan boleh diaktifkan pada suhu tinggi. Ini membantu mengurangkan pembentukan produk tidak spesifik pada peringkat awal tindak balas PCR, dengan itu meningkatkan kekhususan.

Memandangkan Taq polymerase perlu diaktifkan pada suhu yang lebih tinggi, produk tidak khusus mungkin dihasilkan pada permulaan tindak balas PCR. Untuk mengatasi masalah ini, enzim PCR hot-start telah diperkenalkan, termasuk varian tidak aktif pada suhu rendah dan boleh diaktifkan pada suhu tinggi. Ini membantu mengurangkan pembentukan produk tidak spesifik pada peringkat awal tindak balas PCR, dengan itu meningkatkan kekhususan.