RPMI 1640 Sederhana (Institut Memorial Roswell Park)

Media kultur Rpmi-1640 pada asalnya direka khusus untuk kultur limfosit dan kini digunakan secara meluas dalam kultur pelbagai sel normal dan kanser, termasuk sel HeLa, sel Jurkat, sel McF-7, sel PC12, sel PBMC, astrosit dan kanser sel. Ia adalah salah satu media yang paling banyak digunakan. Kesan unik medium RPMI RPMI 1640 berbanding media lain adalah kerana ia mengandungi glutathione agen pengurangan dan kepekatan vitamin yang tinggi. Medium kultur RPMI 1640 mengandungi biotin, vitamin B12, dan PABA, yang tidak terdapat dalam MEM dan DMEM Eagle.

Kandungan RPMI 1640 Sederhana

L-glutamin (Glutamine)

L-glutamin (Glutamine) ialah unsur nutrien penting dalam kultur sel, tetapi ia tidak stabil dalam larutan dan akan merosot secara spontan. Jumlah L-glutamin boleh sewenang-wenangnya diselaraskan mengikut keperluan penyelidikan medium tanpa L-glutamin, dan penambahan L-glutamin segar atau penggantinya pada masa penggunaan adalah lebih bermanfaat kepada pertumbuhan sel.

L-alanyl-L-glutamin (Ala-Glu), juga dikenali sebagai alanyl-glutamin dan alanyl-glutamyl dipeptide, ialah aditif kultur sel termaju yang boleh menggantikan secara langsung L-glutamin dalam medium kultur sel. l-Glutamine ialah nutrien penting dalam kultur sel, tetapi ia tidak stabil dalam larutan dan akan, walau bagaimanapun, ia tidak stabil dalam larutan dan secara spontan merosot untuk menghasilkan ammonia dan asid piroglutamat, yang mana ammonia berbahaya kepada sel, manakala L-alanyl- L-glutamin sangat stabil dalam larutan akueus dan tidak merosot secara spontan. Mekanisme penggunaan selular ialah semasa kultur sel, sel akan secara beransur-ansur melepaskan peptidase ke dalam medium kultur untuk menghidrolisis L-alanil-L-glutamyl menjadi L-alanine dan L-glutamin, dan kemudian sel akan mengambil dan menggunakan kedua-dua hidrolisis ini. produk. Proses penggunaan selular L-alanyl-L-glutamyl adalah serupa dengan strategi kultur penambahan aliran, di mana tahap L-glutamin yang rendah ditambah secara berterusan ke dalam medium kultur, dengan itu meningkatkan penggunaan L-glutamin tanpa menghasilkan lebihan. ammonia, yang lebih kondusif untuk pertumbuhan sel. L-alanyl-L-glutamyl boleh menggantikan L-glutamin equimolar, sesuai untuk semua sel, memerlukan sedikit penyesuaian, dan boleh memanjangkan masa kultur sel. Ia juga boleh memanjangkan masa kultur sel dan mengurangkan bilangan laluan, yang menjimatkan masa dan wang. Sel yang dikultur dalam medium yang ditambah dengan L-glutamin menunjukkan pengurangan aktiviti yang lebih perlahan daripada yang dikultur dalam medium yang ditambah dengan L-glutamin. Tempoh kelewatan yang lebih lama adalah disebabkan oleh masa yang diperlukan untuk pembebasan peptidase dan pencernaan dipeptida.

NEAA (Asid Amino Bukan Penting)

NEAA (Asid Amino Bukan Penting), iaitu 7 NEAA L-alanine, asid L-glutamat, L-asparagine, asid L-aspartik, L-proline, L-serine dan glisin yang ditambahkan pada medium MEM, boleh mengurangkan sampingan kesan daripada penghasilan asid amino bukan penting sel sendiri semasa kultur sel dan menggalakkan percambahan dan metabolisme sel secara berkesan.

Glukosa boleh diselaraskan sesuka hati mengikut keperluan penyelidikan, yang mudah dan cepat. Medium jenis gula tinggi biasanya digunakan untuk sel yang cepat berkembang dengan lekatan yang rendah, sel mieloma hibridoma, sel klonal, sel transfeksi DNA yang berubah, pelbagai sel perumah virus primer, kultur sel tunggal dan pengeluaran vaksin, seperti penggunaan Sel CHO untuk mengekspresikan EPO dan pengeluaran vaksin hepatitis B. Medium rendah gula lebih sesuai untuk kultur metabolisme yang lebih perlahan, sel yang bergantung kepada melekat.

HEPES ialah penimbal biologi yang sangat baik, yang tidak mempunyai kesan toksik pada sel. Medium dengan HEPES boleh mengekalkan julat pH yang malar untuk jangka masa yang lebih lama, yang boleh menghalang pertumbuhan sel secara berkesan daripada terjejas teruk oleh turun naik pH medium kultur yang besar. Ia boleh digunakan dalam inkubator bebas CO2.

Fenol merah digunakan sebagai penunjuk PH dalam medium kultur untuk memantau pH medium kultur secara berterusan. Merah fenol menjadikan kultur kuning sederhana pada PH rendah, dan ungu pada PH lebih tinggi, dan merah pada PH 7.2~7.4, yang paling sesuai untuk kultur sel. Walau bagaimanapun, merah fenol juga mempunyai beberapa kelemahan. Kajian telah menunjukkan bahawa fenol merah boleh meniru kesan hormon steroid (terutamanya estrogen), jadi apabila menggunakan sel sensitif estrogen (seperti tisu payudara), sebaiknya gunakan medium tanpa fenol merah. Fenol merah boleh mengganggu pengesanan semasa analisis sitometrik aliran. Selain itu, kehadiran phenol red dalam beberapa formulasi medium bebas serum boleh mengganggu keseimbangan natrium-kalium.

Penyelesaian Penisilin-streptomisin

Campuran penisilin-streptomisin, juga biasanya dirujuk sebagai "antibiotik dwi", adalah antibiotik yang paling biasa digunakan dalam kultur in vitro untuk mencegah pencemaran mikrob, di mana penisilin mengganggu sintesis dinding sel bakteria dan amat berkesan terhadap bakteria Gram-positif, manakala streptomycin menghalang sintesis protein bakteria dengan mengikat subunit 30S ribosom bakteria dan amat berkesan terhadap Streptomycin yang mengikat kepada subunit 30S ribosom bakteria dan menghalang sintesis protein bakteria, yang berkesan terhadap kedua-dua bakteria Gram-negatif dan Gram-positif, tetapi amat berkesan terhadap bakteria Gram-negatif. Gabungan penisilin dan streptomisin boleh menghalang kebanyakan pencemaran bakteria.

Produk ini mengandungi asid amino, vitamin, garam tak organik dan banyak komponen lain yang diperlukan untuk pelbagai kultur sel, tetapi tidak mengandungi protein, lipid atau sebarang faktor pertumbuhan, jadi produk harus digunakan dengan serum atau bahan tambahan tanpa serum.

Peringatan

Produk ini telah ditapis dan dinyahbakteria dan harus digunakan dengan berhati-hati untuk operasi aseptik untuk mengelakkan pencemaran.
Jangan beku-cairkan produk untuk mengekalkan penggunaan terbaik produk.
Produk ini bertujuan untuk penyelidikan saintifik atau penggunaan kajian lanjut sahaja, bukan untuk diagnosis atau rawatan.