Jenis PCR (Tindak Balas Rantaian Polimerase)

Polimerase Chain Reaction (PCR) ialah teknik biologi molekul serba boleh yang digunakan untuk menguatkan urutan DNA atau RNA tertentu. Selama bertahun-tahun, pelbagai jenis PCR telah dibangunkan untuk memenuhi keperluan penyelidikan dan diagnostik yang berbeza. Berikut adalah beberapa jenis PCR yang biasa:

1. PCR konvensional: Ini ialah kaedah PCR standard yang melibatkan kitaran denaturasi, penyepuhlindapan dan lanjutan. Ia digunakan untuk amplifikasi umum DNA, penjujukan, dan pengklonan.
2. PCR Transkripsi Songsang (RT-PCR): RT-PCR digunakan untuk menguatkan RNA menjadi DNA pelengkap (cDNA) dan sering digunakan untuk mengkaji ekspresi gen. Dua variasi biasa termasuk RT-PCR kuantitatif (qRT-PCR) untuk mengukur tahap RNA dan RT-PCR bersarang untuk meningkatkan sensitiviti.
3. PCR Masa Nyata (qPCR): PCR masa nyata membolehkan kuantifikasi DNA atau RNA semasa proses penguatan. Ia digunakan secara meluas untuk analisis ekspresi gen, kuantiti viral load, dan genotaip.
4. PCR berbilang: Multiplex PCR menguatkan berbilang jujukan sasaran dalam satu tindak balas. Ia berharga untuk mengesan pelbagai patogen atau genotaip berbilang lokus secara serentak.
5. PCR bersarang: PCR bersarang melibatkan dua pusingan amplifikasi, di mana produk PCR pertama berfungsi sebagai templat untuk yang kedua. Ia digunakan untuk meningkatkan kekhususan dan sensitiviti, terutamanya apabila bekerja dengan DNA terdegradasi atau salinan rendah.
6. PCR Mula Panas: PCR permulaan panas menggunakan polimerase DNA diubah suai yang tidak aktif pada suhu yang lebih rendah. Ini menghalang penguatan bukan khusus semasa peringkat awal PCR dan amat berguna apabila bekerja dengan templat yang kompleks.
7. PCR Kesetiaan Tinggi: PCR kesetiaan tinggi menggunakan polimerase DNA dengan keupayaan membaca pruf untuk meminimumkan ralat semasa replikasi DNA. Ia penting untuk aplikasi seperti penjujukan DNA dan pengklonan.
8. PCR Digital (dPCR): PCR digital membahagikan sampel kepada beribu-ribu tindak balas kecil, membolehkan pengiraan mutlak molekul DNA atau RNA sasaran. Ia sangat tepat dan digunakan dalam pengesanan dan kuantifikasi alel yang jarang berlaku.
9. PCR songsang: PCR songsang menguatkan serpihan DNA dengan jujukan yang diketahui di hujungnya, menjadikannya berguna untuk mengkaji kawasan yang tidak diketahui yang mengapit jujukan yang diketahui.
10. PCR koloni: PCR koloni digunakan untuk menyaring koloni bakteria untuk kehadiran serpihan DNA tertentu, selalunya selepas eksperimen pengklonan.
11. PCR Sambungan Bertindih (Penyambungan dengan Sambungan Bertindih atau SOE-PCR): SOE-PCR digunakan untuk mencipta molekul DNA chimeric atau melakukan mutagenesis terarah tapak dengan menggabungkan serpihan DNA dengan urutan bertindih.
12. PCR asimetri: PCR asimetri menggunakan lebihan satu primer untuk secara keutamaan menguatkan satu untai DNA sasaran. Ia digunakan dalam penjujukan DNA dan genotaip.

Ini hanyalah beberapa daripada banyak teknik PCR khusus yang tersedia, setiap satu disesuaikan dengan keperluan penyelidikan atau diagnostik tertentu. Penyelidik memilih jenis PCR yang sesuai berdasarkan sifat projek mereka dan maklumat yang ingin mereka perolehi.