Apakah Kuantiti Pendarfluor

Kuantasi pendarfluor merujuk kepada kaedah yang digunakan untuk mengukur jumlah atau kepekatan bahan (seperti DNA, RNA, protein, atau molekul lain) berdasarkan keupayaannya untuk memancarkan pendarfluor. Teknik ini memanfaatkan sifat molekul tertentu untuk pendarfluor apabila terdedah kepada panjang gelombang cahaya tertentu. Berikut ialah beberapa aplikasi biasa kuantiti pendarfluor:

1. Kuantiti DNA dan RNA:

• Pewarna pendarfluor seperti PicoGreen atau SYBR Green mengikat molekul DNA atau RNA, menyebabkan ia menjadi pendarfluor.
• Keamatan pendarfluor yang dipancarkan adalah berkadar dengan jumlah DNA atau RNA yang ada, membolehkan pengukuran kuantitatif.

1. Kuantiti Protein:

• Pewarna pendarfluor seperti pewarna fluorescein atau Cy boleh mengikat protein atau tag protein.
• Keamatan pendarfluor berkorelasi dengan kepekatan protein, membolehkan kuantifikasi.

1. Ujian Selular:

• Probe atau pewarna pendarfluor boleh digunakan untuk mengukur komponen atau aktiviti selular tertentu (cth, tahap ion kalsium, perubahan pH).
• Perubahan dalam keamatan pendarfluor menunjukkan perubahan dalam kepekatan atau aktiviti molekul sasaran.

Kaedah:

• Keluk Piawai: Untuk mengukur molekul sasaran dengan tepat, lengkung piawai sering dihasilkan menggunakan kepekatan molekul yang diketahui. Keluk ini mengaitkan keamatan pendarfluor dengan kepekatan.
• Pengukuran Pendarfluor: Pengukuran biasanya dilakukan menggunakan pendarfluor atau pembaca plat yang dilengkapi dengan keupayaan pengesanan pendarfluor. Instrumen ini memancarkan panjang gelombang cahaya tertentu untuk merangsang fluorofor dan kemudian mengukur pendarfluor yang dipancarkan.

Kelebihan:

• Kepekaan: Pengesanan pendarfluor adalah sangat sensitif, membolehkan pengesanan kepekatan rendah molekul.
• Kekhususan: Pewarna pendarfluor boleh dipilih untuk mengikat secara khusus kepada molekul sasaran, meminimumkan gangguan latar belakang.
• Kuantitatif: Keamatan pendarfluor memberikan ukuran langsung jumlah molekul sasaran, membolehkan kuantiti yang tepat.

Aplikasi:

Kuantiti pendarfluor digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang seperti biologi molekul, biokimia, diagnostik klinikal, dan penemuan ubat. Ia memudahkan pengukuran dan analisis yang tepat bagi biomolekul dan proses selular, menyumbang kepada kemajuan dalam penyelidikan dan diagnostik.